使用BOD五日生化測定儀時，樣品稀釋是保障檢測有效性的關鍵操作，以下四類情況必須進行稀釋處理，以確保培養后溶解氧消耗處于 40%-70% 的理想區間，避免檢測結果失真或失敗。

一、高濃度有機物水樣需優先稀釋

當水樣來自高污染源頭（如食品加工廢水、釀酒廢水），或目視觀察有明顯有機物腐敗特征（如渾濁度高、散發酸臭味），這類水樣 BOD 值通常超過 600mg/L，若直接檢測，培養過程中溶解氧會被快速耗盡（2-3 天內降至 0mg/L），無法完成五日生化反應，導致結果偏低（僅反映部分有機物降解）。例如含大量蛋白質的屠宰廢水，原水樣 BOD 可達 3000-5000mg/L，需稀釋 10-100 倍后，使稀釋后水樣 BOD 控制在 200-400mg/L，才能保證五日期間溶解氧持續供應。此外，即使外觀清澈但含高可溶性有機物的水樣（如醬油廢水），也需通過稀釋降低有機物負荷 —— 這類水樣若直接檢測，會因微生物快速繁殖消耗氧氣，導致后期溶解氧不足，檢測值僅為實際值的 60%-70%。

二、預實驗顯示溶解氧消耗超限時必須稀釋

按標準方法進行 24 小時預實驗后，若原水樣溶解氧消耗率＞70%（即 24 小時內消耗的溶解氧占初始值的 70% 以上），說明水樣中可降解有機物含量已超過當前溶解氧的承載能力。例如初始溶解氧為 9mg/L，24 小時后降至 2mg/L，消耗率約 78%，此類水樣需立即稀釋 —— 通過 1:10 稀釋后，有機物濃度降至 1/10，溶解氧消耗速率減緩，可滿足五日培養需求。若梯度預實驗中（1:10、1:100 等稀釋比例），低倍數稀釋組（如 1:10）消耗率仍＞70%，需繼續提高稀釋倍數（如 1:100），直至某一稀釋組消耗率落入 40%-70% 區間。

三、超過儀器檢測量程的水樣需強制稀釋

BOD 測定儀的量程存在上限（常見 0-600mg/L、0-1000mg/L），若通過 COD 值推算或同類水樣經驗判斷，水樣 BOD 值超過儀器最大量程，必須稀釋至量程范圍內。例如儀器量程為 0-600mg/L 時，COD=2000mg/L 的工業廢水（按 BOD=COD×0.5 估算，BOD 約 1000mg/L），需稀釋 2 倍（1:2）使預計值降至 500mg/L；若 COD=5000mg/L，需稀釋 10 倍（1:10）使預計值控制在 250mg/L 左右。稀釋時需嚴格按比例操作，避免因稀釋不足導致檢測值 “爆表”（顯示為量程最大值），或稀釋過度增加誤差。

四、溶解氧消耗異常的水樣需針對性稀釋

部分水樣雖初始濃度判斷不明確，但預實驗顯示溶解氧消耗存在異常：若培養 5 天后原水樣溶解氧＜1mg/L（處于厭氧狀態），說明有機物過多導致缺氧，微生物代謝受抑制，檢測結果無法反映真實 BOD 值；若平行樣測定時，原水樣偏差＞20%（因局部缺氧導致降解不均），需通過稀釋改善反應條件。此外，含抑制性物質的高濃度水樣（如含少量重金屬的工業廢水），稀釋可降低抑制物質濃度 —— 例如某化工廢水原水樣中重金屬濃度較高，抑制微生物活性，稀釋 10 倍后抑制作用減弱，微生物才能正常降解有機物，使檢測結果更準確。

稀釋操作需遵循對應規范：采用移液管精準量取，避免用量筒導致的體積誤差；稀釋水需提前曝氣（溶解氧≥8mg/L）并加入營養鹽，保證微生物代謝需求；稀釋后輕輕搖勻（避免氣泡產生），靜置 10 分鐘再測定初始溶解氧。若稀釋后仍出現溶解氧消耗過快（如 1:100 稀釋組 3 天內溶解氧＜2mg/L），需進一步提高稀釋倍數，直至滿足五日培養要求。通過針對性稀釋，可使各類高濃度或異常水樣的 BOD 檢測成功率提升至 90% 以上，為水質評估提供可靠數據。